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ÿþDes protéines non mitochondriales à un transfert Western. basket puma fenty Les signaux de bande de PUMA mitochondrial et de PUMA non mitochondrial ont été déterminés par densitomie à l'aide du logiciel NIH ImageJ, comme nous l'avons décrit précédemment [31]. Par la suite, l ampleur de la translocalisation mitochondriale de PUMA, appelée indice mtPUMA, a été calculée à l aide de l équation ci-dessous.Nous avons examiné un panel de huit lignées de cellules GBM et deux lignées de cellules AA pour l'expression de EGFR .

EGFRvIII interagit avec PUMA, mais pas Bax et Bmf, dans les xénogreffes GBM. Les protéines extraites de trois xénogreffes de GBM exprimant EGFRvIII, comme indiqué dans basket puma homme pas cher le panneau b, ont été soumises à une immunoprécipitation / un transfert de type Western pour déterminer l'étendue de l'interaction de EGFRvIII avec des protéines pro-apoptotiques co-exprimées. Un anticorps anti-EGFR (Ab) a été utilisé pour basket puma montante immunoprécipiter EGFRvIII.

Et D-317 MG) et avec EGFRvIII transfecté de manière stable . De manière similaire, dans trois lignées de GBM exprimant EGFR, il a été démontré que PUMA co-immunoprécipitait avec EGFR (Fig. 1d). Les IgG n'ont pas donné de signaux indiquant une spécificité d'immunoprécipitation. L'interaction EGFR-PUMA a été confirmée par IP inverse en utilisant un anticorps PUMA (Un rapport précédent avait montré que l'EGFR pouvait exister dans le cytoplasme sous basket puma noir une forme libre non liée à la membrane.

Ensemble, ces résultats indiquent que l'EGFR et l'EGFRvIII coexpriment de manière paradoxale avec des protéines pro-apoptotiques et interagissent spécifiquement avec PUMA dans le GBM humain.En utilisant une cohorte de 101 gliomes et 12 tissus cérébraux normaux, nous avons examiné les taux d'EGFR / EGFRvIII et de PUMA via l'IHC. Les résultats indiquent une corrélation positive significative entre les niveaux d'expression de EGFR / EGFRvIII et de PUMA (p = 0,039). Comme le montre la figure 2a.

Panneau supérieur: un GBM primaire coloré positivement pour EGFR / EGFRvIII et PUMA. Panneau inférieur: gliome de grade II présentant une coloration négative pour les deux protéines. Des sections tumorales consécutives basket puma noir femme ont été utilisées dans ces études.Pour déterminer si PUMA est essentiel pour l'induction de l'apoptose dans les GBM, un ARNsi spécifique de PUMA a été utilisé pour réguler négativement la transcription de PUMA et la réponse des cellules U87MG GBM.

Comme le montre la figure 3a, le test TUNEL a montré que l'inactivation de PUMA rend les cellules U87MG résistantes à l'apoptose (2,5%), induites par des traitements à l'anisomycine pendant 48 heures. En revanche, les cellules U87MG transfectées avec l'ARNsi contrôle subissent une apoptose significative induite par l'anisomycine (45,5%). Dans l  analyse, les signaux jaunes fusionnés représentent l ADN fragmenté nucléaire.