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Ein weiterer Signalgeber für ER-Stress ist IRE1, der zur Aktivierung von JNK führt [10]. In Übereinstimmung mit einem ER-stressinduzierten Weg der FFA-vermittelten Zytotoxizität ist die Hepatozytenlipoapoptose auch mit der JNK-Aktivierung bei Steatohepatitis von Nagetieren und Menschen assoziiert, und die JNK-Hemmung vermindert die Lipoapoptose in diesen Modellen [12, 13]. Somit ist die ER-stressassoziierte JNK-Aktivierung ein potenzieller zellulärer Mechanismus, der zur Hepatozyten-Lipoapoptose beiträgt. Das Mitglied der Bcl-2-Proteinfamilie kann Apoptose induzieren oder verhindern [14]. Die JNK-Aktivierung kann mit einer Fehlregulation dieser Kernmaschinerie puma basket black für den Zelltod in Verbindung gebracht werden, wodurch der Zelltod gefördert wird [4].

Die Gesamt-RNA wurde aus den Zellen unter Verwendung des Trizol-Reagens (Invitrogen) extrahiert und mit Moloney-Maus-Leukämievirus-Reverse-Transkriptase (Invitrogen) und Random-Primern (Invitrogen) in komplementäre DNA revers transkribiert. Die Quantifizierung der komplementären puma basket bow DNA-Matrize wurde mit Echtzeit-PCR (LightCycler; Roche Applied Science) unter Verwendung von SYBR-Grün (Molecular Probes) als Fluorophor durchgeführt.

(A) (A, B) Western-Blot-Analyse wurde für Bcl-2-Proteine   unter Verwendung von Ganzzelllysaten aus Huh-7-Zellen durchgeführt, die mit Vehikel (Veh), 800 uM PA, 800 uM PA plus 400 uM PO oder 400 uM PO behandelt wurden allein für 8 Stunden. (B) Huh-7-Zellen wurden wie oben beschrieben mit FFAs behandelt. PUMA-mRNA wurde durch Echtzeit-PCR quantifiziert. Die Falteninduktion wurde durch Normalisierung auf 18S bestimmt. Die puma basket classic damen Daten stellen den Mittelwert und den Fehler von 3 unabhängigen Experimenten dar, die jeweils dreifach durchgeführt wurden. . PA plus PO-behandelte Zellen. (C) Huh-7-Zellen wurden durch Immunfluoreszenzmikroskopie auf die Aktivierung von Bax nach einer Behandlung mit entweder Vehikel (Veh), 800 uM PA, 800 uM PA plus 400 uM PO oder 400 uM PO allein für 16 Stunden untersucht.

Der verwendete Primärantikörper erkennt den N-Terminus von Bax, der bei Aktivierung von Bax als Antigen exponiert wird. Grüne Fluoreszenz zeigt aktiviertes Bax und blaue Fluoreszenz zeigt DAPI-Färbung. Die Grafik zeigt die Quantifizierung von 5 Experimenten. . PA plus PO-behandelte Zellen. Vorläufige Studien zur Lipoapoptose haben die nachgelagerten Folgen von FFA-vermitteltem ER-Stress nicht aufgezeigt. Die PO-Dämpfung der ER-Stressantwort ermöglicht die weitere Aufspaltung dieser Downstream-Ereignisse. Ein wesentlicher nachgelagerter Mediator von ER-Stress ist JNK, das an einer Steatohepatitis beim Menschen und bei Mäusen beteiligt puma basket grau ist [36].

Zum Beispiel haben frühere Studien die Bedeutung der JNK-1-Aktivierung hervorgehoben, die zur PUMA-Proteininduktion während der Lipoapoptose führt [15]. In diesen Studien wird durch den genetischen Abbau von PUMA die Hepatozytenlipoapoptose abgeschwächt [15]. Die aktuelle Studie erweitert diese Beobachtungen, indem sie zeigt, dass die Hemmung des ER-Stresses mit PO diese JNK-abhängige Dysregulation proapoptotischer Bcl-2-Proteine   abschwächt. Diese zytotoxischen Reaktionen auf gesättigte FFA scheinen auf ER-Stress zurückzuführen zu sein. Ein sich abzeichnendes Bild der Lipoapoptose entwickelt sich mit dem ER-Stress vor der JNK-Aktivierung, der dann wahrscheinlich zusammen mit anderen Mediatoren wie CHOP zu einer erhöhten PUMA-Transkription und Bim-Aktivierung beiträgt [35].