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Ein weiterer Signalgeber für ER-Stress ist IRE1, der zur Aktivierung von JNK führt [10]. In Übereinstimmung mit einem ER-stressinduzierten Weg der FFA-vermittelten Zytotoxizität ist die Hepatozytenlipoapoptose auch mit der JNK-Aktivierung bei Steatohepatitis von Nagetieren und Menschen assoziiert, und die JNK-Hemmung vermindert die Lipoapoptose in diesen Modellen [12, 13]. Somit ist die ER-stressassoziierte JNK-Aktivierung ein potenzieller zellulärer Mechanismus, der zur Hepatozyten-Lipoapoptose beiträgt. Das Mitglied der Bcl-2-Proteinfamilie kann Apoptose induzieren oder verhindern [14]. Die JNK-Aktivierung kann mit einer Fehlregulation dieser Kernmaschinerie puma basket black für den Zelltod in Verbindung gebracht werden, wodurch der Zelltod gefördert wird [4].

Die Gesamt-RNA wurde aus den Zellen unter Verwendung des Trizol-Reagens (Invitrogen) extrahiert und mit Moloney-Maus-Leukämievirus-Reverse-Transkriptase (Invitrogen) und Random-Primern (Invitrogen) in komplementäre DNA revers transkribiert. Die Quantifizierung der komplementären puma basket bow DNA-Matrize wurde mit Echtzeit-PCR (LightCycler; Roche Applied Science) unter Verwendung von SYBR-Grün (Molecular Probes) als Fluorophor durchgeführt.

(A) (A, B) Western-Blot-Analyse wurde für Bcl-2-Proteine   unter Verwendung von Ganzzelllysaten aus Huh-7-Zellen durchgeführt, die mit Vehikel (Veh), 800 uM PA, 800 uM PA plus 400 uM PO oder 400 uM PO behandelt wurden allein für 8 Stunden. (B) Huh-7-Zellen wurden wie oben beschrieben mit FFAs behandelt. PUMA-mRNA wurde durch Echtzeit-PCR quantifiziert. Die Falteninduktion wurde durch Normalisierung auf 18S bestimmt. Die puma basket classic damen Daten stellen den Mittelwert und den Fehler von 3 unabhängigen Experimenten dar, die jeweils dreifach durchgeführt wurden. . PA plus PO-behandelte Zellen. (C) Huh-7-Zellen wurden durch Immunfluoreszenzmikroskopie auf die Aktivierung von Bax nach einer Behandlung mit entweder Vehikel (Veh), 800 uM PA, 800 uM PA plus 400 uM PO oder 400 uM PO allein für 16 Stunden untersucht.

Der verwendete Primärantikörper erkennt den N-Terminus von Bax, der bei Aktivierung von Bax als Antigen exponiert wird. Grüne Fluoreszenz zeigt aktiviertes Bax und blaue Fluoreszenz zeigt DAPI-Färbung. Die Grafik zeigt die Quantifizierung von 5 Experimenten. . PA plus PO-behandelte Zellen. Vorläufige Studien zur Lipoapoptose haben die nachgelagerten Folgen von FFA-vermitteltem ER-Stress nicht aufgezeigt. Die PO-Dämpfung der ER-Stressantwort ermöglicht die weitere Aufspaltung dieser Downstream-Ereignisse. Ein wesentlicher nachgelagerter Mediator von ER-Stress ist JNK, das an einer Steatohepatitis beim Menschen und bei Mäusen beteiligt puma basket grau ist [36].

Zum Beispiel haben frühere Studien die Bedeutung der JNK-1-Aktivierung hervorgehoben, die zur PUMA-Proteininduktion während der Lipoapoptose führt [15]. In diesen Studien wird durch den genetischen Abbau von PUMA die Hepatozytenlipoapoptose abgeschwächt [15]. Die aktuelle Studie erweitert diese Beobachtungen, indem sie zeigt, dass die Hemmung des ER-Stresses mit PO diese JNK-abhängige Dysregulation proapoptotischer Bcl-2-Proteine   abschwächt. Diese zytotoxischen Reaktionen auf gesättigte FFA scheinen auf ER-Stress zurückzuführen zu sein. Ein sich abzeichnendes Bild der Lipoapoptose entwickelt sich mit dem ER-Stress vor der JNK-Aktivierung, der dann wahrscheinlich zusammen mit anderen Mediatoren wie CHOP zu einer erhöhten PUMA-Transkription und Bim-Aktivierung beiträgt [35].

In Herzmuskelafferenzen der Dorsalwurzelganglien tragen sie zur Nozizeption und zur schädlichen asics 2e sympathischen Aktivierung während der Ischämie bei. Schließlich berichten wir, dass ein hemmender Einfluss der ASIC2-vermittelten Barorezeptoraktivität die sympatho-erregenden Reflexe der Chemorezeptoren und Skelettmuskel-Afferenzen sowie die ASIC1a-vermittelte Erregung von Zentralneuronen während Angst, Bedrohung oder Panik unterdrückt. Das Translationspotential der Aktivierung von ASIC2 in kardiovaskulären Krankheitszuständen kann eine vorteilhafte Sympathohemmung und parasympathische Aktivierung sein.

Die Zusammensetzung der Untereinheiten bestimmt den Phänotyp. Wenn neue Mitglieder der Säugetierunterfamilie von DEG / ENaC in peripheren Nerven bei Ratten und im menschlichen Gehirn identifiziert wurden (Price et al., 1996; Waldmann et al., 1996) und als säureempfindliches Ion bezeichnet wurden Die Unterfamilie der Kanäle (ASICs) (Waldmann asics 2e herren et al., 1997a) hat uns fasziniert, dass diese Mitglieder möglicherweise auch eine Rolle bei der neurosensorischen Transduktion von Barorezeptoren spielen (Bianchi und Driscoll, 2002; Krishtal, 2003; Wemmie et al., 2006) ).

Expression von ASICs RNAs in Karotiskörpern asics 48 und Immunfluoreszenz von ASIC-Proteinen in Clustern von Glomuszellen. Die Immunfluoreszenz von säuremessendem ASIC1b und 3 zeigt, dass sie in Karotiskörpern stärker exprimiert werden als das mechanosensitivere ASIC2. Letzteres ist das vorherrschende ASIC in Nodose Ganglien, Neuronen. Die Immunfluoreszenztafeln zeigen die Coexpression von ASIC1 und ASIC2 in einem Abschnitt und die Coexpression von ASIC1 und ASIC3 in einem anderen. Auch hier ist die ASIC2-Fluoreszenz im Vergleich zu ASIC1 und ASIC3 vernachlässigbar.

Wir führten elektrophysiologische asics badmintonschuhe Studien (Clamping von ganzen Zellen) an isolierten Glomuszellen durch und stellten fest, dass die Exposition bei niedrigem pH-Wert schnelle vorübergehende Einwärtsströme und Depolarisationen mit der charakteristischen Kinetik von ASICs mit schnellem Gate hervorrief, gefolgt von anhaltenderen Reaktionen (Tan et al., 2007) (Abb. 12). Die vorübergehenden Reaktionen wurden selektiv durch Amilorid und nicht durch den TRPV1-Antagonisten Capsazepin, den BK-Kanalblocker Iberiotoxin oder das Psalmotoxin-Gift, einen Blocker der homomeren ASIC1a-Kanäle, blockiert (Tan et al., 2007).

Die transienten säureempfindlichen Ströme in Glomuszellen wurden in Ca 2 -freier Lösung und durch Laktat signifikant erleichtert. Andere haben berichtet, dass ASICs durch eine Abnahme von extrazellulärem [Ca 2] sowie extrazellulärem Lactat erleichtert werden und der Mechanismus sowohl eine Verringerung des Kationenblocks des Kanals als auch asics bedeutung eine Erhöhung der pH-Empfindlichkeit beinhaltet (Immke und McCleskey, 2003) 2001; Zhang et al. 2006).

Wie von Hattori et al. Gezeigt, führte die heterologe Expression von ASIC3 in COS-7-Zellen zu einer höheren pH-Empfindlichkeit und einer schnelleren Aktivierungskinetik als die Expression von ASIC2 (Hattori et al., 2009). Wichtiger und mit größerer Relevanz für unsere Ergebnisse bei ASIC2-Nullmäusen sowie der erhöhten pH-Empfindlichkeit von Glomuszellen bei SHR führt die Koexpression von ASIC2 und ASIC3 zu einem heteromultimeren Kanal mit geringerer pH-Empfindlichkeit, der nach ASIC2-Expression signifikant erhöht wird wird reduziert oder gestrichen (Abb. 16). Zunehmende Anzeichen deuten darauf hin, dass ASICs wichtige Sensoren für Muskelafferenzen sind.